O tratamento diretamente observado (TDO) é uma estratégia instituída pela Organização Mundial de Saúde que visa garantir a tomada da medicação pela pessoa adoecida e consequentemente melhorar a adesão da mesma ao tratamento. As diretrizes preconizam a observação da ingesta do medicamento que deve ocorrer prioritariamente de segunda a sexta, e que o doente tenha tido 24 ingestões de medicação observadas na fase de ataque (dois primeiros meses), e 48 ingestões de medicação observadas na fase de manutenção (quatro meses restantes).  Nesse sentido, é importante que o TDO seja realizado adequadamente principalmente com aquelas pessoas em maior risco de abandono do tratamento, sendo imprescindível que os profissionais de saúde compreendam sua operacionalização. Assim, nosso estudo objetiva analisar o conhecimento e a incorporação das diretrizes do tratamento diretamente observado da tuberculose pelos profissionais de saúde da Estratégia de Saúde da Família. Para tanto, realizamos um estudo de métodos mistos, combinando dados quantitativos e qualitativos, com 138 profissionais de saúde dos municípios interioranos do Amazonas: Itacoatiara, Parintins, Manacapuru, Tabatinga e Tefé. Aplicamos o instrumento “Avaliação da Transferência de Políticas – Inovação, Informação e Conhecimento em Tuberculose” no período de janeiro a abril de 2016. A análise dos dados foi realizada por meio de estatística descritiva e análise de conteúdo de Bardin. Nossos resultados demonstraram que 85,85% dos profissionais compreendem as diretrizes e protocolo do TDO, porém 78,82% seguem tais diretrizes e 71,48% se sentem motivados para inovar as suas práticas em relação ao TDO. Além disso, 76,68% participam nos treinamentos ofertados em relação ao manejo da tuberculose. Em entrevista realizada, observamos que embora alguns profissionais afirmem que compreendem as diretrizes do TDO, os discursos denunciam falta de conhecimento em relação a esta modalidade de tratamento, uma vez que o TDO consiste em observar a tomada da medicação, não em apenas em perguntar se o paciente tomou (Recorte1: a gente procurava saber (...), não ele não tomou ontem, mas hoje ele já tomou dois comprimidos – PS1 – município de Itacoatiara/ Recorte2: Eu deixava (a medicação) por semana, né! Aí geralmente eu deixava assim três dias: segunda, terça e quarta(...) no final de semana mais na segunda eu ia lá - PS2 – município de Tabatinga). Frente ao exposto, observamos a necessidade de ofertar treinamentos aos profissionais de saúde voltados para a realização do TDO especificamente, bem como, estimular a participação dos mesmos.